Áp suất trong hệ thống HPLC

Trong sắc ký lỏng hiệu năng cao thì áp suất có ảnh hưởng rất nhiều đến giá trị phân tích. Bên cạnh đó nếu xét về mặt kỹ thuật thiết bị thì áp suất ảnh hưởng lớn đến tuổi thọ của thiết bị. Vì vậy khi gặp các rắc rối về áp suất thì chúng ta cần phải giải quyết nó 1 cách toàn diện.

Khi nói đến vấn đề áp suất thì chúng ta sẽ gặp các hiện tượng sau:

loading...
  1. Áp suất quá cao so với bình thường: đây là vấn đề thường gặp nhất ở các phòng kiểm nghiệm. Với hiện tượng này sẽ làm cho tuổi thọ của thiết bị chúng ta bị giảm ( các đường ống, van đóng mở, flow-cell,…), cột bị giảm tuổi thọ,… Ngày nay các hệ thống HPLC đều có hệ thống an toàn của riêng nó vì vậy khi gặp việc áp quá cao thiết bị sẽ tự ngắt đảm bảo an toàn thiết bị. Nhưng như vậy sẽ làm giảm hiệu suất làm việc của phong kiểm nghiệm. Thử nghĩ, chúng ta lên mẫu xong, định sẽ chạy qua đêm nhưng vì áp suất tăng đột ngột làm hệ thống bị ngừng. Thế là sáng hôm sau mình phải chạy lại từ đầu.
  2. Áp suất thấp hơn so với bình thường: đây cũng là 1 vấn đề thường gặp ở các phòng kiểm nghiệm (dù ít khi gặp hơn). Vấn đề này có 2 nguyên nhân chính: thứ nhất là do lỗi của kiểm nghiệm viên – thiết lập bơm không đúng như quy trình; thứ hai là do hệ thống bị rò rỉ ở đâu đó. Ở nguyên nhân do kiểm nghiệm viên, chúng ta hãy kiểm tra lại quy trình và thiết lập của máy. Ở nguyên nhân thứ hai, mọi thứ sẽ khó hơn. Chúng ta phải kiểm tra trên phần mềm của máy xem có báo rò rỉ ở đâu module nào không – ở các dòng máy của Hitachi đều có trang bị tính năng này. Sau đó kiểm tra đường ống ở từng module, bắt đầu từ bơm, lên đến autosampler, column oven. Đôi lúc chúng ta phải nhờ đến hỗ trợ kỹ thuật bên nhà cung cấp – với dòng Chromaster và sản phẩm cung cấp bởi công ty 2H thì các bạn sẽ được hỗ trợ trong vòng 24 giờ từ lúc có sự cố – để tìm hiểu chổ rò rỉ ở đâu.

Nhận biết nguyên nhân gây ra áp suất cao và phương hướng giải quyết:

Kiểm tra áp suất của hệ thống khi có cột và khi không có cột trong hệ thống. Chúng ta thử gỡ cột ra và thay thế bằng ống mao quản và theo dõi áp suất của hệ thống. Điều này giúp ta phát hiển ra hệ thống đang bị nghẹt do hệ thống bên trong hay là do cột.

  • Nếu sau khi gỡ cột ra mà áp suất hệ thống vẫn cao. Có thể là hệ thống đường ống đã bị nghẹt. Chúng ta cần liên lạc với bảo trì của hãng để có thể đưa ra cách vệ sinh tốt nhất cho máy. Lưu ý rằng khi bên bảo trì của hãng xuống sữa chửa, chúng ta cần nhờ họ hướng dẫn chúng ta biết cách để sau này có thể giải quyết vấn đề tương tự.
  • Nếu gỡ cột ra mà áp suất hệ thống giảm xuống. Điều này chứng tỏ cột của chúng ta đang gặp vấn đề.

Khi bạn nghi ngờ áp suất hệ thống của mình tăng cao do cột sắc ký, rất có thể cột sắc ký của bạn đã bị nhiễm bẩn và cần phải được vệ sinh hợp lý. Sau đây là các bước tiến hành vệ sinh cột sắc ký của bạn.

Đầu tiên bạn tiến hành đảo đầu cột và rửa cột bằng chính pha động bạn đang chạy mẫu. Việc làm này giúp bạn có thể rửa những vết bẩn đã bám lên trên màng lọc ở đầu vào của cột. Đôi khi những vẫn đục lơ lửng trong mẫu cũng có thể làm bẩn và nghẹt màng lọc ở đầu cột của bạn và đó là lý do gây ra hiện tượng tăng áp trên hệ thống của bạn.

Nếu sau khi đảo đầu cột mà áp suất vẫn cao. Điều này chứng tỏ cột của bạn đã bị nhiễm bẩn (do tủa của mẫu hoặc pha động bên trong cột, do các hợp chất hấp thụ quá sâu vào trong cột,…). Chúng ta tiến hành rửa cột với các pha động theo thứ tự tăng dần độ phân cực. Bảng bên dưới liệt kê danh sách các dung môi hữu cơ theo thứ tự tăng dần độ phân cực.

bang-do-phan-cuc-cua-dung-moi

Lưu ý:

  • Dùng ít nhất là 25mL của mỗi dung môi để rửa cột.
  • Quá trình rửa cột sẽ tốn thời gian khá lâu và bạn nên thực hiện nó trong chế độ offline. Cũng như bạn nên dự trù trước thời gian để sắp xếp công việc của bạn.
  • Nếu các bạn tiến hành rửa cột bằng các dung môi có độ phân cực thấp như Hexane hay Methylene Chloride thì chúng ta bắt buộc phải tiếp tục rửa cột qua Isopronanol rồi mới được sử dụng với pha động có độ phân cực cao hơn.

Một số người cho rằng chúng ta nên thay thế màng lọc bên trong của cột để cải thiện tình hình tạp bẩn của cột. Nhưng xin thưa, việc làm đó vô cùng khó khăn cũng như cần phải có đầy đủ thiết bị, dụng cụ để chúng ta mở và thay màng lọc của cột.

cau-tao-tien-cot-hplc

Với cấu tạo như vậy thì việc thay thế màng lọc của cột sắc ký lỏng là rất khó. Vì vậy thay vì chúng ta làm việc khó khăn, chúng ta hãy làm những biện pháp phòng ngừa để ngăn chặn việc nghẹt cột xảy ra thì sẽ dễ hơn nhiều.

Mẹo:Kỹ thuật phòng chống hiện tượng nghẹt cột – rẻ mà hữu hiệu:

  1. Sử dụng bảo vệ cột: bao gồm hệ thống lọc dây pha động, bộ bảo vệ cột.
  2. Lọc mẫu cho mỗi lần phân tích.
  3. Lọc pha động cho mỗi lần phân tích.

Đây là những biện pháp dễ dàng, rẻ nhưng vô cùng tiện lợi giúp hạn chế tối đa hiện tượng nghẹt cột trong hệ thống HPLC.

dau-loc-syrine-hplc

Đầu lọc cho hplc

dau-loc-dung-moi

Đầu lọc dung môi

hplc-guard-columm

Tiền cột (bảo vệ cột) cho HPLC

Gửi phản hồi

Website này sử dụng Akismet để hạn chế spam. Tìm hiểu bình luận của bạn được duyệt như thế nào.