Peak nở rộng trong HPLC

Peak nở rộng trong HPLC

Trong quá trình phân tích HPLC, ít nhiều chúng ta đã gặp trường hợp peak của chúng ta bị nở rộng ra hai bên. Điều này nếu không được khắc phục hiệu quả sẽ làm cho chúng ta mất rất nhiều thời gian và công sức. Vậy thì chúng ta hãy cùng nhau tìm hiểu nguyên nhân gây ra hiện tượng này là gì và phòng tránh,khắc phục như thế nào.

Dưới đây là hình ảnh của 1 phổ đồ có peak nở rộng:

loading...

peak-broadening

Peak có thể nở rộng tất cả các peak như hình trên hoặc đôi khi chỉ là 1 vài peak ngẫu nhiên mà thôi. Nguyên nhân chính của hiện tượng này là do: cột của chúng ta đã có tuổi và bị mất hiệu năng, cột bị tắc nghẽn, các mối nối trong hệ thống không tốt, thể tích tiêm mẫu hoặc nồng độ mẫu quá lớn. Ngoài ra khi tiến hành phân tích các mẫu có phân tử khối quá lớn (protein hoặc polymer) cũng gây nên hiện tượng nở rộng peak.

Vậy thì chúng ta khắc phục như thế nào. Nhìn chung chúng ta sẽ có 2 vấn đề chính đó là do phần cứng (cột sắc ký, các mối nối,…) và do phương pháp phân tích.

Với vấn đề do cột sắc ký thì câu trả lời vẫn như các phần trước đó là tiến hành vệ sinh cột. Để phòng tránh hiện tượng này xảy ra, chúng ta luôn lựa chọn cột tốt, bảo quản cột cẩn thận ( luôn vệ sinh cột định kỳ, bảo quản đúng cách và dùng các biện pháp bảo vệ cột khỏi nhiểm bẩn).

Với vấn đề về phương pháp phân tích thì chúng ta có thể khắc phục như sau. Nếu phương pháp của chúng ta có thể tích tiêm mẫu quá cao, chúng ta có thể chỉnh lại thông số này để khác phục hiện tượng trên, cũng như mang đến kết quả phân tích tối ưu nhất.

extra-column-volume

Với thể tích tiêm quá cao sẽ gây ra hiện tượng peak nở rộng.

Còn khi tiến hành phân tích các mẫu có phân tử khối quá lớn như các polymer, protein chúng ta cần xây dựng các phương pháp thích hợp với trang bị phần cứng chuyên dụng. Ví dụ sử dụng các loại cột phân tích chuyên dụng với bộ ổn cột và đầu dò chuyên dụng để mang lại kết quả tốt nhất. Ngoài ra, khi tiến hành phân tích các dạng protein, acid amine chúng ta có thể tiến hành sử dụng các thiết bị chuyên phân tích các chất này.

Gửi phản hồi

Website này sử dụng Akismet để hạn chế spam. Tìm hiểu bình luận của bạn được duyệt như thế nào.