Rửa và tái sinh cột HPLC

Các biểu hiện của cột sắc ký hplc bị bẩn:

  1. Áp suất phân tích tăng cao (quá áp).
  2. Thời gian lưu bị thay đổi.
  3. Các peak bị giãn hoặc chẻ peak( broad and tailing).
  4. Cột mất hoặc giảm  khả năng tách( resolution).

Trong những trường hợp trên hiệu suất sắc ký sẽ xấu đi do nhiều hợp chất không bị rửa giải sẽ bám trên và chiếm hết bề mặt pha tĩnh, khiến pha tĩnh mất khả năng tương tác với pha động cũng như chất cần phân tách.

Tái sinh cột HPLC

Bước đầu tiên thử rửa cột với ACN( acetonitrile) tinh khiết. Nếu sau bước này tình hình không cải thiện nhiều thì thực hiện tái sinh theo cách dưới đây:

loading...

Tái sinh cột sắc ký pha đảo

  1. Tháo cột ra khỏi hệ thống, đảo chiều cột và kết nối lại cột vào hệ thống HPLC( dòng chảy đẩy ngược lại so với hướng thông thường).
  2. Bơm rửa (flush) với 25ml muối/ đệm ( pha động thường dùng cho cột đó) ở tốc độ dòng 1 ml/min
  3. Rửa tiếp với 25ml iso-propanol
  4. Rửa tiếp với 25ml methylene chloride (CH2Cl2)
  5. Rửa tiếp với 25ml hexane
  6. Rửa lại với 25ml methylene chloride (CH2Cl2)
  7. Rửa lại với 25ml iso-propanol
  8. Tháo cột ra và lắp lại theo đúng chiều dòng chảy, rửa với pha động không chứa đệm (vd H2O) sau đó tăng dần tỷ lệ đệm trong pha động lên ( chạy gradient)
  9. Chạy cân bằng cột với 25-50 ml pha động
  10. Tiêm mẫu lại thử, bạn sẽ thấy hiệu năng của cột được hồi phục.

Chú ý: trong một số trường hợp nhiễm bẩn cột, dimethyl-formamide ( (CH3)2N-CHO ) là dung môi rửa tốt hơn so với methylene chloride và hexane.

Tái sinh cột sắc ký pha thường

  1. Tháo cột ra khỏi hệ thống, đảo chiều cột và kết nối lại cột vào hệ thống HPLC( dòng chảy đẩy ngược lại so với hướng thông thường).
  2. Rửa cột với 50ml methanol:Chloroform – 50:50,
  3. Rửa tiếp với 50ml ethyl acetate,
  4. Tháo cột ra và lắp lại theo đúng chiều dòng chảy,
  5. Chạy cân bằng cột với 50ml pha động,
  6. Tiêm mẫu lại thử, bạn sẽ thấy hiệu năng của cột được hồi phục.

Gửi phản hồi

Website này sử dụng Akismet để hạn chế spam. Tìm hiểu bình luận của bạn được duyệt như thế nào.